一、先确认细胞 “身份”，避免实验白费
实验前务必核实细胞系身份，优先选择提供 STR 鉴定报告的供方（人源细胞 21 位点、小鼠细胞 18 位点），避免交叉污染。 非 STR 鉴定适用的细胞，可通过形态观察、物种特性验证确认，杜绝用错细胞株导致的结果偏差。二、核心操作：培养、传代、冻存与复苏
1. 准备工作
沿用细胞原培养条件（培养基、血清），新收到的赛库生物细胞需补加血清（运输时血清浓度仅 5%）。 提前了解细胞生长特性，便于后续观察调整。2. 传代操作
贴壁细胞：弃旧液→PBS 冲洗→加胰酶消化（按细胞指引控制时间）→血清终止→吹打分散→800-1000rpm 离心 3-5 分钟→重悬接种。 悬浮细胞：直接吸弃部分旧液补新液，或离心后重悬传代，注意控制细胞密度。 混合型细胞：先收集悬浮细胞，再按贴壁细胞流程消化贴壁细胞，合并接种。展开剩余69%3. 冻存与复苏
冻存：离心收集细胞→加入含 10% DMSO 的冻存液→4℃静置 30 分钟→-80℃过夜→转入液氮长期保存。 复苏：液氮中取出冻存管→37℃快速融化（2 分钟内）→75% 酒精消毒管外→离心弃上清→重悬接种，干冰运输细胞需静置 3 天后再复苏。三、污染防治：守住实验关键防线
细菌污染：培养基浑浊或出现沙状沉淀，可用 100μg/ml 庆大霉素（杆菌）或 25μg/ml 环丙沙星（颗粒状细菌）处理一周。 真菌污染：出现菌丝或酵母出芽结构，用 100μg 两性霉素 B/T25 瓶处理，注意毒性，细胞状态尚可时及时干预。 支原体污染：无明显外观变化，需每月用 PCR 法检测；新细胞先检测再使用，不同细胞分开操作，避免交叉传播。 日常防控：人员按规范穿戴防护装备，耗材灭菌合格，操作时悬空加液、避免交叉使用器具。四、常见问题速答
Q：培养液必须加双抗吗？A：非必需，长期使用易催生耐药性，建议根据实验室环境自行决定。 Q：细胞有碎片怎么办？A：贴壁细胞用 PBS 冲洗 2-3 遍，悬浮细胞离心清洗，重复 2-3 次即可。 Q：培养瓶用密闭盖还是透气盖？A：均可，密闭盖旋进 2/3 留气隙，透气盖直接使用。 Q：-80℃能长期存细胞吗？A：仅适合短期（1-2 周）存放，长期需转入液氮。五、环境保障：润联细胞房实验室消毒服务
细胞培养的成功，离不开洁净无菌的环境支持。即使操作再规范，环境中的隐性污染（如支原体、霉菌孢子）仍可能影响细胞状态。
润联生命科学提供专业细胞房实验室上门消毒服务，针对培养箱、超净工作台、实验台面、空间空气等关键区域，采用高效安全的消毒方案，彻底消杀支原体、细菌、真菌等微生物，阻断污染传播链条。服务覆盖北京、上海、广深、杭州、成都等主要一二线城市，24 小时快速响应，最大限度减少对实验进程的影响，为你的珍贵细胞系和实验数据保驾护航。
发布于：陕西省